بهینه سازی تولید، خالص‏سازی و شناسایی پلی گالاکتوروناز از قارچ عامل بیماری ساق سیاه لوبیا

Authors

سعید امین زاده استادیار بیوشیمی، ‏پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، ‏ایران

ناصر فرخی استادیار زیست‏شناسی مولکولی، دانشگاه شاهرود، ایران

Abstract:

مقدمه: در این مطالعه، تولید یک پلی گالاکتوروناز از قارچ بومی عامل بیماری ساق سیاه لوبیا، فعال در اسیدیته 3 و مناسب برای استفاده در صنایع آب میوه‏گیری بررسی شد. اشکال مناسب کربن، نیتروژن و فسفر شناسایی و برای تولید بهینه آنزیم به کار گرفته شد . مواد و روش ‏‏ ها: قارچ عامل بیماری ساق سیاه لوبیا در محیط تولید کشت شد. سکروتوم قارچی جدا شد و از آن پلیگالاکتوروناز به کمک کروماتوگرافی ستونی به خلوص نسبی رسید. فعالیت بیوشیمیایی آنزیم و سکروتوم هر دو به روش کالریمتری تحلیل شد. تولید پلیگالاکتوروناز با تغییر در محتوی محیط کشت، اسیدیته و دما از طریق آزمایشات فاکتوریل ناقص موسوم به تاگوچی بهینه شد. سینتیک آنزیمی و پایداری دمایی و اسیدیته آزمایش شد . نتایج: گستره ای از قندها به غیر از گلوکز و کیتین تولید را افزایش دادند. سولفات آمونیوم و پپتون نشان دادند که منابع مناسب ازتی هستند. در بین منابع فسفاتی، دی پتاسیم هیدروژن فسفات بیش‏ترین تأثیر را نشان داد. تحلیل به کمک روش آرایههای متعامد تاگوچی نشان داد که اسیدیته، دما، آمونیوم سولفات و عناصر میکرو اثر معنی داری در تولید پلی گالاکتوروناز داشتند. به علاوه، مقایسات میانگین گویای این بود که حالت بهینه تولید در اسیدیته 6، دمای 35 درجه سانتی‏گراد، 2 گرم در لیتر آمونیوم سولفات و 2 میلی ‏ گرم در لیتر عناصر میکرو به دست آمد . بحث و نتیجه ‏ گیری: آنزیم خالص شده، وزن مولکولی برابر 70 کیلو دالتون داشت که بیش‏ترین فعالیت خود را در اسیدیته 3 و دمای 30 درجه سانتی ‏ گراد نشان می داد. در بین کاتیون های مورد آزمون، آهن دو ظرفیتی فعالیت آنزیم را تا 2 برابر افزایش داد ولی عصاره قارچی پاسخ متفاوتی نشان داد .

Upgrade to premium to download articles

Already have an account?login

similar resources

واکنش ارقام بادمجان به قارچ Phytophthora capsici عامل بیماری ساق سیاه در استان کهگیلویه و بویراحمد

در این بررسی واکنش نه رقم بادمجان به بیماری ساق سیاه که در چند سال اخیر در مناطق مختلف استان کهگیلویه و بویراحمد مشاهده شده است مورد بررسی قرار گرفت. برای جداسازی عامل بیماری، بافت‌های آلوده بعد از شستشو با آب، به قطعات پنج میلی‌متر تقسیم و بدون ضدعفونی سطحی روی محیط کشت نیمه انتخابی CMA-PARP کشت شدند. از بافت‌های آلوده هجده جدایه به دست آمد که بر اساس خصوصیات مورفولوژیک و نیاز دمایی پرگنه‌های ...

full text

واکنش ارقام بادمجان به قارچ phytophthora capsici عامل بیماری ساق سیاه در استان کهگیلویه و بویراحمد

در این بررسی واکنش نه رقم بادمجان به بیماری ساق سیاه که در چند سال اخیر در مناطق مختلف استان کهگیلویه و بویراحمد مشاهده شده است مورد بررسی قرار گرفت. برای جداسازی عامل بیماری، بافت های آلوده بعد از شستشو با آب، به قطعات پنج میلی متر تقسیم و بدون ضدعفونی سطحی روی محیط کشت نیمه انتخابی cma-parp کشت شدند. از بافت های آلوده هجده جدایه به دست آمد که بر اساس خصوصیات مورفولوژیک و نیاز دمایی پرگنه های ...

full text

اثر مهاری پروتئین‌های مهارکننده پلی گالاکتوروناز لوبیا بر آنزیم پلی گالاکتوروناز قارچ‌های بیماری‌زای Fusarium oxysporum و Ascochyta rabiei گیاه نخود

Plant pathogenic microorganisms produce a variety of enzymes capable of degrading different polysaccharides of the plant cell walls. Pathogens use these enzymes to penetrate and colonize host cells. Polygalacturonases are thought to be the first cell wall-degrading enzymes secreted by pathogens when they grow on plant cell walls. Oligogalacturonic acids with the polymerization degrees of 10 to ...

full text